UV-детектор является самым распространенным из применямых в хроматографии типом детекторов. Его основные достоинства: широкий спектр детектируемых аналитов, простота эксплуатации и конструкции, возможность использования при градиентном элюировании и широкий линейный диапазон. Линейности эта характеристика детектора, говорящая о том, что зависимость отклика детектора (Y) от количества аналита (Х) может быть описана линейны уравнением (риунок 1).

Часто получается так, что в подвижных фазах, используемых при хроматографии белков необходимо использовать компоненты поглощающие на длине волны детектирования.

Как известно, обязательным условием идентификации вещества в хроматографии является совпадение времени выхода пика с его стандартом.  Иначе или система нестабильна, или вещества в образце нет. Я тоже так думал, но оказывается бывают исключения. Так в нашу лабораторию поступила аналитическая колонка С18, на которой определяют содержание интерферона на разных стадиях его производства. Методика фармакопейная и годами используемая. Откалибровались по стандарту (1 точка)- все идеально. Разброс по площади меньше 1%, колебания времени тоже мизерные.

Однажды был какой-то на удивление дурацкий день: у меня 2 раза в моем присутствии при фильтрации забивался фильтр и мигом его срывало к чертовой матери, в результате чего ренатурат капал даже с потолка, еще у одного здорового парня вдруг кровь пошла носом ну и так по мелочи. А еще у одного хроматографиста метод, который он перенес уже на десяток с лишним хроматографов, по непонятным причинам ни как не хотел воспроизводиться на очередном ВЭЖХ-хроматографе.

Аффинная хроматография основана на строго специфическом взаимодействии связанных с сорбентом антител с антигеном. Благодаря этому аффинная хроматография достаточно широко применяется в биотехнологии, т.к. позволяет достаточно легко извлекать минимальные количества целевого вещества из больших объемов, зачастую очень сложных растворов. Но такая специфичность имеет и свою обратную сторону. Так если в катионообменной хроматографии в 90% случаев используют SP или CM Sepharose, то практически для любого белка можно получить несколько аффинных сорбентов с разной емкостью, специфичностью и т.д.

Вопрос достаточно мало рассматриваемый в литературе, но тем не менее очень злободневный в жидкостной хроматографии. Так, например, за прошедший месяц я тем или иным образом сталкивался с этим раза 4. То клапан сработает с запозданием то сам напортачил. Засохшую колонку опять же полежавшую во время жары при +30 в «холодной» комнате пришлось восстанавливать. Работаю на хроматографе без ловушки, так что единичные пузыри бывает залетают.

Недавно ко мне обратились с вопросом "разумно ли приобретать Bio-Rad`овскую BioLogic LP System с целью препаратива белков, как у неё с надежностью, расходниками, подтеканием, соответствует ли производительность заявленной?"
Ни про объемы ни про метод ни слова: простора для полета фантазии хоть отбавляй. Например можно с ходу ответить: не подходит - по произволу подразумевая, что препаратив это от килограмма :). Смешно, но надо как-то поконкретней.

Для анализа/разделения любой смеси веществ возможно использовать практически бесчисленное множество систем подвижных фаз, которые в какой-то степени позволят осуществить задуманное (практически все вещества имеют какой-то заряд (пусть и частичный), какую-то гидрофобность и т.д.). Но эта «степень» будет очень сильно зависеть от выбора конкретной системы. В связи с этим необходимо как-то сузить этот диапазон, отталкиваясь от конкретных задач и условий хроматографического разделения.

Продолжаю отвечать на вопросы, хотя остаюсь при своем мнении, выраженном вчера, о необходимости использовать для вопросов форум на нашем сайте, где вести обсуждение заведомо удобнее.

Итак, от пользователя Nicolya поступило письмо следующего содержания:

"Здравствуйте, уважаемые.