Однажды был какой-то на удивление дурацкий день: у меня 2 раза в моем присутствии при фильтрации забивался фильтр и мигом его срывало к чертовой матери, в результате чего ренатурат капал даже с потолка, еще у одного здорового парня вдруг кровь пошла носом ну и так по мелочи. А еще у одного хроматографиста метод, который он перенес уже на десяток с лишним хроматографов, по непонятным причинам ни как не хотел воспроизводиться на очередном ВЭЖХ-хроматографе.

Потребовалась новая колонка. Бабульку, которая набивала их 30 лет сократили. Дал набить девочкам- выходы пиков ровно в 2 раза быстрее получились. В общем при помощи Супины и всего ненормативного словарного запаса пришлось учиться самому.

На данном видео показано как правильно соединять ВЭЖХ-колонку к трубке (капиляру) при помощи специальных коннекторов. Показано далеко не все, но некоторые моменты очень важны. Например хорошо видно, что перед упаковкой феррула достаточно свободно движется по трубке. Также легко понять какое усилие требуется для создания надежного соединения трубки и колонки.

При самостоятельной упаковке сорбента следует избегать его передавливания. Так когда я работал на ВЭЖХ хроматографе, то однажды очередной упаковки обращено-фазного сорбента С18 в колонку я увидел, что давление повысилось. Я не обратил на это внимание, ацетоновый тест был нормальный и начал разделение. Но при элюции вместо привычной формы пика в виде гаусовской кривой (рисунок а) пик стал значительно ниже, шире и стал похож на холм с плоской вершиной (рисунок б).

Для анализа/разделения любой смеси веществ возможно использовать практически бесчисленное множество систем подвижных фаз, которые в какой-то степени позволят осуществить задуманное (практически все вещества имеют какой-то заряд (пусть и частичный), какую-то гидрофобность и т.д.). Но эта «степень» будет очень сильно зависеть от выбора конкретной системы. В связи с этим необходимо как-то сузить этот диапазон, отталкиваясь от конкретных задач и условий хроматографического разделения.

На ВЭЖХ Dionex поменяли петлю и давление подскочило сразу на 20 bar. Стали думать. Ни чего умнее в голову не пришло, кроме того, что при устанвке новой или замене старой  петли какой-то мусор (кусок не аккуратно отрезанной трубки, например) забился в канал предколонки. Отсоеденили колонку, перевенули предколонку и дали 3-ой поток. Затем все собрали, давление вернулось в норму. Делов-то, а голову 20 минут ломали, каких только предложений не было: прибор-то сложнющий!

Мораль: чем проще решение, тем ближе к истине.

Удачных выходных!