Теория и практика хроматографии

При проведении анализа иногда, безо всякого сообщения происходит прекращение записи сигнала с одного детектора, на рис.1 запись идет с UV-детектора (верхняя хроматограмма), а ELSD - моего основного (нижняя хроматограмма), не идет :

Прибор: жидкостной хроматограф фирмы Varian в составе: автосемплер - ProStar 430; насосы – ProStar 210; UV-детектор  – ProStar 325; испаряющий светорассеивающий детектор – ProStar PL-ELSD 2100.
Колонка Monochrom Diol 3μ 100×2.0 mm.
Программа: Galaxie Chromatography Workstation версия 1.9.3.2.

Пробоподготовка при определении жирорастворимых витаминов в плазме крови.

В эппендорф берется 300 мкл. плазмы крови, смешивается с 300 мкл. этанола и 300 мкл. гексана.

Полученная смесь интенсивно встряхивается на вортексе в течение 1 мин., затем центрифугируется 3 мин. при 3000 об./мин. Супернатант отделяется. Операция повторяется не менее 3 раз.

Полученные гексановые вытяжки объединяются и упариваются в токе азота или под вакуумом при Т не более 40⁰С.

Наконец то мы сделали это! Надеюсь, что кому-нибудь понравится!

Видео, (жаль на английском) наглядно показывает основные принципы жидкостной хроматографии и узлы ВЭЖХ хроматографа.

На видео (опять на английском) показаны основные узлы газового хроматографа и принцип его работы.

Несколько видеоклипов с примерами проведения тонкослойной хроматографии, очень красиво, надо как нибудь самому попробовать

Thin Layer Chromatography

Очень качественное видео по упаковке аксиальных колонок низкого давления, показаны все основные этапы: подготовка колонки, заполнение сорбентом, упаковка, распаковка. На таком Тарас Алексеевич Горкун (тут, TAG) работает, завидуйте!

На видео сначала показаны различия хроматографии при ламинарном и турбулентном потоках сольвента, а дальше как раз показан остроумный принцип двухколоночной хроматографии с 3-мя подвижными фазами.

Очень подробно показано приготовление градиентного SDS-ПААГ, применяемого для разделения белков, сильно различающихся по массе, и для электрофокусирования.

Я занимаюсь определением фосфолипидного состава на приведенном выше оборудовании и использую фазы: 100% Гексан - 55%iPS 40%Hex 4,5%H20 AcNH4 и периодически начал замечать пропажу сигнала на ELSD. Это может быть из-за:

1. Отсутствия промывочной жидкости в автосэмплере (использую 80% метанол)

2. Из выходного патрубка детектора начинает капать элюент и где-то через 1-2 часа - хроматограмма пустая, только профиль градиента.

Хорошие новости!

Не прошло и 1 дня, после отправки письма в Varian, мне позвонил замечательный молодой человек имы с ним замечательно поговорили.

Как и ожидалось в log-файлах ошибок не было (ошибок-то прибор не выдавал ), так-что он предположил методическую ошибку (т.е. непредвиденную работу прибора в этой буферной системе с конкретно этим типом веществ), при которой в определенный момент "что-то там засоряется".

Вполне логично.

Предложил выход: оказывается, буржуи советуют начинать с минимальных температур (градусов с 30) и максимального потока газа (3-4л), а потом постепенно увеличивать температуру и понижать скорость газа.

Колонка – сердце любого хроматографического процесса, т.к. вокруг нее все крутиться и если с ней что-нибудь не так, то и толку, ясное дело, не будет. Но как ее проконтролировать?

Хроматограф – это прежде всего сложнейший и дорогущий инструмент.

Извините, что пишу в таком наставительном тоне, но это очень важно понимать и помнить постоянно. К сожалению, понимают далеко не все и я тоже не был исключением, поэтому и пишу.

Начав работать на Varian'е я столкнулся с тем, что у меня плавали площади пиков на ProStar PL-ELSD 2100, лазерном детекторе, и я ни как не мог понять в чем дело, то ли методическая ошибка, то ли еще что (у него еще отклик не линейный). И тогда я решил проверить точность вкола. Самым простым способом является ацетоновый тест, но лазерный детектор ацетон не "видит", к тому же было подозрение, что на диольной колонке он будет задерживаться. Мне помогло то, что у меня после колонки стоит УФ-детектор, который, как известно отличается линейностью отклика, а также прекрасно детектирующий ацетон на 280нм.

Я работал на нескольких хроматографах, но первый хроматограф, конечно, стоит особняком.
Это был замечательный прибор «Ultrograd» фирмы LKB.  Вот он красавец!

К нам на сайт пришло письмо следующего содержания:

"Здравствуйте.
На Вашем сайте, почему-то доминируют хроматографы зарубежных фирм. А отечественные представлены только фирмами, услугами которых мы уже не пользуемся, поскольку на рынке появились хроматографы более удобные в экслпуатации (например хроматографы Кристалл-5000.2 СКБ "Хроматэк" и Хромос ГХ-1000 ЗАО "Химаналитсервис". Надежность и удобность в работе отечественных хроматографов также высока. Кроме того, решать возникающие вопросы напрямую с фирмой-изготовителем намного проще, нежели с фирмой-посредником."

Доргогие посетители сайта, от всей души поздравляем Вас с Новым годом, желаем Вам всего наилучшего и ждем в следующем году!

Пусть Ваши пики будут ровными, клапана не залипают, и все дилиться как задумано!

Удачи!