UV-детектор является самым распространенным из применямых в хроматографии типом детекторов. Его основные достоинства: широкий спектр детектируемых аналитов, простота эксплуатации и конструкции, возможность использования при градиентном элюировании и широкий линейный диапазон. Линейности эта характеристика детектора, говорящая о том, что зависимость отклика детектора (Y) от количества аналита (Х) может быть описана линейны уравнением (риунок 1).

Часто получается так, что в подвижных фазах, используемых при хроматографии белков необходимо использовать компоненты поглощающие на длине волны детектирования.

Как известно, обязательным условием идентификации вещества в хроматографии является совпадение времени выхода пика с его стандартом.  Иначе или система нестабильна, или вещества в образце нет. Я тоже так думал, но оказывается бывают исключения. Так в нашу лабораторию поступила аналитическая колонка С18, на которой определяют содержание интерферона на разных стадиях его производства. Методика фармакопейная и годами используемая. Откалибровались по стандарту (1 точка)- все идеально. Разброс по площади меньше 1%, колебания времени тоже мизерные.

Однажды был какой-то на удивление дурацкий день: у меня 2 раза в моем присутствии при фильтрации забивался фильтр и мигом его срывало к чертовой матери, в результате чего ренатурат капал даже с потолка, еще у одного здорового парня вдруг кровь пошла носом ну и так по мелочи. А еще у одного хроматографиста метод, который он перенес уже на десяток с лишним хроматографов, по непонятным причинам ни как не хотел воспроизводиться на очередном ВЭЖХ-хроматографе.

Хроматограф очень капризная штука: подавай ему все самое лучшее. А еще ему нужно электричество, тоже очень хоршего качества и, желательно, без перебоев. Об этом как-то многие или забывают или не придают особого значения. Но до тех пор пока горячий петух не клюнет, ну или особо деятельный электрик ни кого не предупредив в щиток полезет:). Так что об бесперебойном питании хроматографа желательно беспокоиться заранее.

Повышение давления в ВЭЖХ системе достаточно часто встречающаяся проблема. Причины могут быть разные и все их можно разделить на две основные группы:

1. засорение жидкостного тракта хроматографа 

2. загрязнение хроматографической колонки.

Проблема попадания воздуха в систему в жидкостной хроматографии достаточно часто возникает из-за множества причин, часть из них, а также примеры их устранения, приведена тут. Но недавно я столкнулся с тем, что воздуха в системе не наблюдается, а УФ-детектор «рисует» характерную картинку засушенной колонки (Рисунки 1 и 2 ).

Уважаемые посетители и пользователи сайта прошу Вас указать каие ресурсы Интернета, по Вашему мнению, полезны для хроматографиста. Для этого пишите коментарии, в которых указывайте ссылку на выбранный Вами ресурс и краткую его характеристику (для чего и для кого нужен, какие задачи и т.д.). В дальнейшем по Вашим коментариям будет сделан отдельный раздел на сайте.

Аффинная хроматография основана на строго специфическом взаимодействии связанных с сорбентом антител с антигеном. Благодаря этому аффинная хроматография достаточно широко применяется в биотехнологии, т.к. позволяет достаточно легко извлекать минимальные количества целевого вещества из больших объемов, зачастую очень сложных растворов. Но такая специфичность имеет и свою обратную сторону. Так если в катионообменной хроматографии в 90% случаев используют SP или CM Sepharose, то практически для любого белка можно получить несколько аффинных сорбентов с разной емкостью, специфичностью и т.д.